ABagrose琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒（柱型）

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操作说明书及组成：

ABagrose琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒(柱型)

v 适用范围：

适用于琼脂糖凝胶DNA回收，无需称重。

v 试剂盒组成、储存、稳定性：

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

v 注意事项

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到12,000rpm。

2. 溶胶液DD中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

3. 回收纯化的DNA片段一般在100bp到20kb之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。

4. 切胶回收时，紫外灯观察对DNA片段有损坏作用，应该尽可能使用能量低的长波紫外线，并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间也可选用艾比根生物ABLUe蓝光切胶仪。

5. pH值≤7.5时，吸附膜吸附DNA的效率最高。如果切下来的凝胶中含有电泳缓冲液太多，造成溶胶后溶胶液pH偏高，会导致回收率降低。溶胶后，如果溶胶液依旧保持黄色，说明pH正常；如果变成橘红色或者淡紫色，说明pH偏高，可在胶充分溶解后加5-10μL 3M醋酸钠（pH5.2）将pH值调到5-7（黄色）或补加少量溶胶液DD。

6. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。

v 操作步骤：

提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

1. 在长波紫外灯或蓝光下，用干净刀片或专用切胶管将所需回收的DNA条带切下，尽量切除不含DNA的凝胶（边缘不含DNA条带凝胶尽可能去除），得到凝胶体积越小越好。

2. 将切下含有DNA条带的凝胶放入1.5mL离心管，加500μL溶胶液DD。

3. 65℃水浴或金属浴放置5-10分钟（直至固态胶完全溶解）。

每2-3分钟上下颠倒混匀一次帮助加速溶解。

4. 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室温放置1分钟，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。如果总体积超过750μL，可分两次将溶液加入同一个吸附柱EC中。

5. 加入500μL漂洗液WB （请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心1分钟，弃掉废液。

6. 再次加入500μL漂洗液WB，12,000rpm离心1分钟，弃掉废液。

7. 将吸附柱EC放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

8. 取出吸附柱EC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50μL洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液EB事先在65℃水浴中加热效果更好），室温放置2分钟，12,000rpm 离心1分钟。如果需要较多量DNA，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，再次离心1分钟。

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