ABspin细菌基因组DNA提取试剂盒(柱型)

ABspin细菌基因组DNA提取试剂盒(柱型)

生产厂家:北京艾比根生物技术有限公司 订货/技术支持QQ:1492876083 仅供科学研究使用!

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规 格

价 格

ABspin细菌基因组DNA提取试剂盒(柱型)

AB1061

50次

380元

ABspin细菌基因组DNA提取试剂盒(柱型)

AB1062

100次

680

产品简介:

通过高效蛋白沉淀液沉淀蛋白,然后通过结合液调节结合条件,高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。得到的DNA 比传统试剂盒纯度更高,可直接用于酶切、转化、测序及PCR 等分子生物学实验。

产品特点:

■ 快 速:节省时间,可重复性好。

■ 简 单:操作简单,步骤少。

储存条件保质期:室温(15-25℃)放置,可保存18个月。

试剂盒组成:

试剂盒组成

保存

50

100

缓冲液BA

室温

5mL

10mL

裂解液BB

室温

20mL

40mL

沉淀液BC

室温

10ml

20ml

结合液BD

室温

25mL

50mL

漂洗液WB

室温

20mL                           20mL×2

使用前请加入指定量的无水乙醇(4倍),并标记!

洗脱缓冲液EB

室温

10mL

10mL

吸附柱CB3 &收集管(2mL

室温

50T

100T

说明书

室温

1

1

使用前准备:

1.第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

2.需自备无水乙醇或95%乙醇。如需消化RNA可自备RNA酶;G+阳性菌提取需自备溶菌酶。

3.开始实验前根据需要将水浴锅或干热器预热到37℃或者65备用

操作步骤:

  1. 1-3mL培养菌液,12,000rpm离心1min,尽可能的吸弃上清,收集菌体。提示:起始处理量可以根据细菌密度、种类、预期产量进行调整,如果菌体过量超过裂解能力,反而会严重降低产量。

  2. 加入100μL缓冲液BA,旋涡震荡重悬菌体。提示:对于革兰氏阳性菌(G+):可加入2L溶菌酶 (50mg/mL)颠倒混匀,37℃温育20分钟。

  3. 加入400μL裂解液BB,上下颠倒混匀,65℃放置10min,直到溶液变成澄清透明粘稠液体提示:如果不变澄清表明裂解不充分,应当减少起始菌体用量。如果RNA残留较多,需要去除RNA,可以加1L RNase A(20mg/ml)溶液,混匀,37放置5min

  4. 冷却后缓慢加入200μL沉淀液BC,在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀30,混匀后可能见到一些小的分散蛋白团块

  5. 12,000rpm离心5min,这时候应该可以见到管底/的蛋白沉淀,也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面

  6. 小心吸取35L上清到一个新的1.5mL离心管中 提示: 吸取上清时,注意不要吸到管底和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中,可再次离心2min后取上清

  7. 缓慢加入35L等体积的结合BD,涡旋振荡充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。提示:上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要,混匀不充分严重降低产量,必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。如果要提高产量可以多吸取更多上清,并增加结合液的量,保持等体积,分几次上柱子

  8. 将上一步混合物加入吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中)12,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液。

  9. 加入500μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)12,000 rpm 离心1min,弃掉废液。

  10. 加入500μL漂洗液WB,12,000 rpm 离心1min,弃掉废液。

  11. 吸附柱CB3放回空收集管中,12,000 rpm离心1min,尽量除去漂洗液,以免残留乙醇抑制下游反应。

  12. 取出吸附柱CB3,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位50μL洗脱缓冲液EB, 室温放置2min12,000 rpm 离心1min提示:洗脱体积越大,洗脱率越高,如果需要浓度DNA,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于3L,体积过小降低DNA洗脱效率,DNA产量减少。DNA可以存放在4如果要长时间存放,可以放置在-20℃-80℃

 测试:1.5mL BL21ED3菌,提取测试。未加RNses A 消化RNA。


说明书下载:ABspin细菌基因组DNA提取试剂盒(柱型) .pdf


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