核酸纯化柱的选择专题2：核酸纯化柱不同层（膜厚度）洗脱效率的比较；交流咨询QQ:1492876083

核酸纯化柱的选择专题2：核酸纯化柱不同层（膜厚度）洗脱效率的比较；交流咨询QQ:1492876083

本测试方法：

通过质粒提取试剂盒测试不同厚度的硅胶膜，用50，100，150微升洗脱测定洗脱效率

实验室设计

1：选择实际层数为2,3,4,5,6,7,8,9,10层（1mm厚，相当于市场厚度的一倍，市场大多是0.5mm厚膜，可自行拆解观察厚度，不同公司厚度不一样）

2：先用50微升体积洗脱测定一次浓度；然后将样品补充50微升洗脱缓冲液，将其从新加入核酸纯化柱洗脱测定浓度；第二次补充50微升洗脱缓冲液，将150微升缓冲液加入到核酸纯化柱再次洗脱测定浓度，测试硅胶膜的洗脱效率。

3：起始浓度的菌液选取3mL测试（不同收集浓度的菌产量有差别，后面我们将进行测试）

4：选择含PUC19质粒的DH5A菌作为提取对象。

实验材料：

含PUC19质粒DH5A菌株，分光光度计 。

实验方法

按照艾比根质粒小量提取试剂盒提取过夜培养的菌液，测定浓度。

实验结果数据分析：

PUC19质粒提取原始测量浓度数据：

膜层数

洗脱

体积

货号

260/280

260/230

Conc. (Ng/ul)

2层

50ul

P2-50/500/5000

1.98

2.23

333.1

3层

50ul

P3-50/500/5000

2.03

2.25

260.1

4层

50ul

P4-50/500/5000

2.02

2.24

266.7

5层

50ul

P5-50/500/5000

2.01

2.2

251.9

6层

50ul

P6-50/500/5000

2.02

2.26

267.1

7层

50ul

P7-50/500/5000

2.02

2.24

268.5

8层

50ul

P8-50/500/5000

1.98

2.19

290

9层

50ul

P9-50/500/5000

2.0

2.21

272.3

10层

50ul

P10-50/500/5000

1.98

2.18

289.4

2层

100ul

P2-50/500/5000

2.09

2.24

163.5

3层

100ul

P3-50/500/5000

2.07

2.2

155.9

4层

100ul

P4-50/500/5000

2.1

2.23

166.1

5层

100ul

P5-50/500/5000

2.08

2.21

165.8

6层

100ul

P6-50/500/5000

2.1

2.24

161.7

7层

100ul

P7-50/500/5000

2.1

2.24

177.8

8层

100ul

P8-50/500/5000

2.07

2.2

177.3

9层

100ul

P9-50/500/5000

2.08

2.21

176.3

10层

100ul

P10-50/500/5000

2.08

2.22

182.5

2层

150ul

P2-50/500/5000

2.1

2.18

117.4

3层

150ul

P3-50/500/5000

2.11

2.21

111.7

4层

150ul

P4-50/500/5000

2.12

2.24

114.2

5层

150ul

P5-50/500/5000

2.12

2.25

116.3

6层

150ul

P6-50/500/5000

2.14

2.26

112

7层

150ul

P7-50/500/5000

2.12

2.23

123.1

8层

150ul

P8-50/500/5000

2.13

2.27

119.9

9层

150ul

P9-50/500/5000

2.15

2.28

122.9

10层

150ul

P10-50/500/5000

2.11

2.25

130.3

图1 膜厚度和洗脱体积比较

洗脱体积（图1）

平均浓度（ng/ul））

备注

50ul洗脱

250

3ml菌液测试

100ul洗脱

150

3ml菌液测试

150ul洗脱

100

3ml菌液测试

洗脱体积

总产量

备注

50ul洗脱

12

3ml菌液测试

100ul洗脱

16

3ml菌液测试

150ul洗脱

18

3ml菌液测试

洗脱体积

洗脱效率

备注

50ul洗脱

75%

3ml菌液测试

100ul洗脱

95%

3ml菌液测试

150ul洗脱

相对比较，假设100%

3ml菌液测试

结果分析及建议：

  1. 对于需要50ul洗脱体积的建议选择P2-P5厚度的膜，可以满足高浓度要求。

  2. 对于洗脱体积大于50建议选择p6-10的膜，产量增加。

  3. 其它厚度的刻自行研究测试。

  4. 不同菌液和质粒提取含量有所差别，具体选择生产企业可自行测试。

  5. 50ul洗脱效率大致75%，100ul洗脱效率大致95%。建议洗脱体积控制50-100ul左右，可增加洗脱效率。

  6. 对于不同配方试剂盒提取样品洗脱效率会有所差别，具体可自行测试研究。

说明：本次实验仅供参考，只是本实验室实验员操作测试对比数据，不同使用环境请自行研究测试。